Flúrljómun smásjá: meginreglur aðferð

Frásog og með tilvísun til-útgeislunar Ijóss frekari ólífrænum og lífrænum vökva er afleiðing af sjálflýsandi eða flúrljómun. Munurinn á fyrirbæri er sú vistun tími frá upptöku og útgeislunar Ijóss hreyfingu. Þegar flúrljómun þessara ferla komið nánast samtímis, en sjálflýsandi - með einhverjum tafar.

sögulegar upplýsingar

Árið 1852, British vísindamaður Stokes, fyrst lýst flúrljómun. Hann kynnti nýja tíma í kjölfar tilrauna með Fluorspar, sem gefa frá sér rautt ljós undir útfjólubláu ljósi. Stokes fram áhugaverð fyrirbæri. Það er tekið eftir því bylgjulengd blómstrandi geislun er alltaf meiri en flæði örvun ljós.

Til að staðfesta tilgátu í 19. öld hafa verið margar tilraunir. Þeir sýndu að fjölbreytni sýna fluoresce undir áhrifum útfjólubláu ljósi. Meðal efni, meðal annars, verið kristalla, kvoðu, steinefni, blaðgrænu, óhreinsuð lyf, ólífræn efnasambönd, vítamín, olíur. Bein notkun litarefna til líffræðilegra prófana byrjaði aðeins 1930

Flúrljómun smásjá: lýsing

Sumir af þeim efnum sem notuð eru í fyrri hluta 20. rannsókna aldar sýndu mikla sérhæfni. стал важнейшим инструментом и в биомедицинских, и в биологических исследованиях. Takk fyrir árangri, sem ekki var hægt að ná með því að andstæður aðferðir, aðferð við flúrljómun smásjá er orðin ómissandi tól í heilbrigðissviði og líffræðilegum rannsóknum. Jafn mikilvæg niðurstöður fengust, og fyrir efni.

? Hvaða kosti hefur aðferð flúrljómun smásjá? Með ný efni hefur orðið mögulegt og val á mjög sértækt klefi submicroscopic hluti. Flúrljómun smásjá geta uppgötva einstaklings sameindir. A fjölbreytni af litarefni leyfa auðkenningu mörgum hlutum í einu. Þrátt fyrir takmarkaða staðbundna upplausn á diffraction mörk búnaði, sem aftur á móti, fer eftir sérstökum eiginleikum sýnisins, að bera kennsl á sameindir neðan þessu stigi er líka alveg mögulegt. Ýmsar sýni eftir geislun sýningarsvæði autofluorescence. Þetta fyrirbæri er mikið notað í bergfræði, grasafræði, hálfleiðurum iðnaður.

Features

Læra vefi úr dýrum eða lifandi smitefni oft flóknar eða of lítil eða mjög sterkt óskilgreinda autofluorescence. Hins vegar gildi í rannsóknum á kaupir aðflutning tengingar efnis efnisþátta spennt á tilteknum bylgjulengd og emitting nauðsynlegan Light Flow styrkleiki. Fluorochromes starfa sem litarefna fær um sjálfstætt festir við mannvirki (sýnilega eða ósýnilega). Þannig að þeir eru með hátt sértækni til að miða, og skammtafræði afrakstur.

стала широко применяться с появлением естественных и синтетических красителей. Flúrljómun smásjá hefur verið mikið notað síðan tilkomu náttúrulegum og tilbúnum litarefni. Þeir áttu ákveðnar styrkleiki snið af útblæstri og örvun og miðaðar við sérhæfða, líffræðilega markmið.

Kennsl borin á einstakar sameinda

Oft í kjöraðstæður, getur þú skráð sjálfstæð eining ljóma. Fyrir þetta, meðal annars, að það er nauðsynlegt að veita nægilega lágt hávaða skynjari og sjón bakgrunn. Fluorescein sameindin bilun vegna photobleaching getur gefið frá sér allt að 300 þúsund. Ljóseindir. Á 20% innheimtu skilvirkni aðferðarinnar og geta skráð þá í magni sem nemur um 60 þúsund.

, основанная на лавинных фотодиодах или электронном умножении, позволяла исследователям наблюдать поведение отдельных молекул на протяжении секунд, а в ряде случаев и минут. Flúrljómun smásjá miðað snjóflóð photodiodes eða rafrænum margföldun, leyft vísindamenn að fylgjast með hegðun einstakra sameinda í gegnum annað, og í sumum tilfellum jafnvel mínútur.

flókið

Lykilatriði í hag bælingu á sjón hávaða bakgrunni. Vegna þess að margir af þeim efnum sem notuð eru í hönnun síur og linsur sýnlr einhverja autofluorescence, viðleitni vísindamanna í upphafi var stilla til framleiðslu á íhlutum með lágan flúrljómun. Hins vegar hafa síðari tilraunir leitt til nýrra niðurstöðu. , основанная на полном внутреннем отражении, позволяет достичь низкого фона и высокоинтенсивного возбуждающего светового потока. Einkum kom í ljós að flúrljómun smásjá, miðað við heildarþyngd innra speglun, það gerir að ná lágu bakgrunn og hár styrkleiki örvun ljós.

vélbúnaður

, основанной на полном внутреннем отражении, заключаются в использовании быстрозатухающей или нераспространяющейся волны. Meginreglur flúrljómun smásjá, byggt á heildarfjölda innri íhugunar er að nota stoða skammlífa bylgju eða evanescent. Það gerist á mörkum milli fjölmiðlum með mismunandi brotstuðli. Í þessu tilviki er geislinn fer í gegnum prisma. Það hefur mikla brotstuðul breytu.

The prisma við hliðina á vatnslausn eða gleri með litla viðfang. Ef Ijósgeisla beint á hana á ská sem er meira afgerandi, geisla er algerlega endurspeglast frá tengi. Þetta fyrirbæri, aftur á móti, veldur nonpropagating bylgjur. Með öðrum orðum, mynda rafsegulsvið sem smýgur inn í miðli með lægri brotstuðul viðfang fjarlægð minna en 200 nanómetrar.

The evanescent bylgja styrkleiki ljóssins myndi nægja til að espa flúrberum. Hins vegar, vegna þess að mjög litlu dýpi, rúmmál hennar verður mjög lítil. Niðurstaðan er lág-stigi bakgrunnur.

breyting

Flúrljómun smásjá er byggð á heildar innri íhugun, getur verið hrint í framkvæmd með epi-lýsingu. Þetta krefst linsur með miklum tölulegum op (að minnsta kosti 1,4, en það er æskilegt að hún náði 1.45-1.6), og að hluta til lýsa sviði tæki. Hið síðarnefnda er náð með litlum blettur stærð. Fyrir meiri einsleitni að nota þunnt hring, hvers er læst með hluta á straumi. Fyrir gagnrýna horn, eftir það er alls spegilmynd, þurfum við öfluga ljósbrot í immersion miðli í linsu og kápa gler í smásjá.